METHYLATION PCR

Xét nghiệm methylation PCR là một kỹ thuật sinh học phân tử dùng để xác định mức độ methyl hóa DNA tại một vị trí cụ thể. Methyl hóa DNA là một dạng biến đổi hóa học của DNA, thường xảy ra tại các vị trí CpG và có vai trò quan trọng trong điều hòa biểu hiện gen.

1. Nguyên lý của xét nghiệm methylation PCR

Xét nghiệm này dựa trên sự biến đổi hóa học của DNA bằng bisulfite, trong đó:

·                     Cytosine không bị methyl hóa (C) sẽ chuyển thành uracil (U).

·                     Cytosine đã được methyl hóa (5-mC) sẽ giữ nguyên.

Sau đó, DNA đã xử lý bisulfite được khuếch đại bằng PCR với các cặp mồi đặc hiệu:

·                     Mồi đặc hiệu với trình tự DNA methyl hóa.

·                     Mồi đặc hiệu với trình tự DNA không methyl hóa.

2. Các loại kỹ thuật methylation PCR phổ biến

·                     MSP (Methylation-Specific PCR): Khuếch đại DNA bằng hai bộ mồi riêng biệt để phân biệt vùng methyl hóa và không methyl hóa.

·                     qMSP (Quantitative Methylation-Specific PCR): Phiên bản định lượng của MSP, sử dụng kỹ thuật PCR real-time.

·                     COBRA (Combined Bisulfite Restriction Analysis): Dựa trên xử lý enzyme cắt giới hạn để phân biệt DNA methyl hóa và không methyl hóa.

·                     Bisulfite Sequencing PCR: Giải trình tự DNA sau xử lý bisulfite để xác định chi tiết mẫu methyl hóa.

3. Ứng dụng của xét nghiệm methylation PCR

·                     Ung thư học: Phát hiện các dấu ấn methyl hóa đặc trưng cho một số loại ung thư (VD: MGMT trong ung thư não, SEPT9 trong ung thư đại trực tràng).

·                     Chẩn đoán di truyền: Đánh giá rối loạn biểu sinh trong các bệnh di truyền như hội chứng Prader-Willi, Angelman.

·                     Sinh học phát triển: Nghiên cứu điều hòa biểu hiện gen và tái lập trình tế bào gốc.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

UpToDate 2025